Содержание арбутина в листьях брусники определяют методом

ВАКАНСИИ В ОБЛАСТИ РАЗРАБОТКИ, ПРОИЗВОДСТВА И ОБРАЩЕНИЯ ЛС

Определение арбутина в листьях брусники обыкновенной

Аннотация

Ключевые слова

Полный текст:

Литература

В. А. Куркин, Фармакогнозия, ООО «Офорт», ГОУ ВПО «СамГМУ Росздрава», Самара (2007).

Ph. Eur. 2012: EuropeanPharmacopoeia, 8 th edition, Strasbourg (FR), pp. 1162 – 1163 (2012).

Uva Ursi Leaf (Arctostaphylosuva-ursi (L.) Spreng). Standards of analysis, quality control, and therapeutic, American Herbal Pharmacopoeia (2008).

С. Г. Абдуллина и др., Фармацевтический анализ, Г. К. Будникова, С. Ю. Гармонова (ред.), Науч. сообщество, Рос. акад. наук, Отделение химии и наук о материалах, Науч. совет по анал. химии, АРГАМАК-МЕДИА, Москва (2013), сс. 316 – 319.

Д. В. Моисеев, Вестник фармации, № 1, 40 – 45 (2011).

Государственная фармакопея СССР, Вып. 2, Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье, МЗ СССР, Медицина, Москва (1990).

Л. П. Охрименко, Г. И. Калинкина, С. Е. Дмитрук, Химия растит. сырья, № 1, 31 – 35 (2005).

Л. М. Федосеева, Химия растит. сырья, № 1, 73 – 77 (2003).

Ссылки

  • На текущий момент ссылки отсутствуют.

Источник

Содержание арбутина в листьях брусники определяют методом

На сегодняшний день неотъемлемой частью номенклатуры лекарственных средств назначаемых в комплексной терапии воспалительных заболеваний мочевого пузыря и мочевыводящих путей (циститы, уретриты) является лекарственное растительное сырье, основные из которых это брусники листья (Vitis – idaeae folia) и толокнянки листья (Uvae ursi folia). Мочегонные и уроантисептические свойства данных растительных объектов связаны в первую очередь с фенольными гликозидами арбутином и метиларбутином, а также с гидрохиноном и его метиловым эфиром [1].

Согласно нормативной документации на данные виды сырья, содержание арбутина в них должно быть не менее 6 % (толокнянки листья) и 4,5 % (брусники листья).

Следует сказать, что все нормативные документы на указанные виды сырья в качестве методики количественного определения арбутина предлагают использовать окислительно-восстановительное титрование йодом. Важно также отметить, что методика обременена сложными процедурами пробоподготовки и очистки, занимающими длительное время и невольно приводящими к возрастанию случайной погрешности. Кроме того, в итоге осуществляется титрование не только арбутина, а некоего комплекса, близких по химическим свойствам, веществ, что также не позволяет оценить истинное содержание арбутина.

Решение указанных вопросов возможно с использованием сепарационных методов анализа (ВЭЖХ, капиллярного электрофореза (КЭ)). И на сегодняшний день известно ряд ВЭЖХ-методик количественного определения арбутина в сырье 3. В то же время использование КЭ может быть более оправданным, поскольку не требуется дорогостоящих растворителей и колонок. Кроме того, наличие более высоких параметров эффективности является ключевым преимуществом при анализе сложных растительных объектов, содержащих десятки, а порой и сотни соединений.

Цель работы

Разработка и валидация методики количественного определения арбутина в толокнянки листьях и брусники листьях с применением капиллярного электрофореза.

Материалы и методы исследования

Для исследования использовали стандартный образец (СО) арбутина (Sigma, с содержанием не менее 98%), а так же образцы сырья толокнянки листья (ОАО «Красногорсклексредства», серия 80714) и брусники листья (ОАО «Красногорсклексредства», серия 80614).

Работу проводили с использованием системы капиллярного электрофореза Капель 103 Р (группа компаний Люмэкс, Россия) с кварцевым капилляром диаметром 50 мкм, общей длинной 75 см и эффективной длинной 65 см. Детектирование осуществляли спектрофотометрически при 254 нм в катодной области капилляра. Напряжение составляло 20 кВ (блок положительной полярности). Для подготовки капилляра и восстановления его поверхности проводили его последовательную промывку водой, 0,5 М раствором кислоты хлористоводородной, водой, 0,5 М раствором натрия гидроксида, водой и затем ведущим электролитом.

В работе реализовывался вариант зонного электрофореза, где в качестве ведущего электролита использовали 0,01М боратный буферный раствор с рН 9,0. Выбор электролита связан с тем, что при данном значении рН, арбутин ионизируется по фенольному гидроксилу (Рисунок 1), являясь при этом заряженной частицей.

Рисунок 1. Зависимость степени ионизации арбутина от рН среды (по данным http://www.chemicalize.org).

Читайте также:  Как выращивают адениум в тайланде

Важно отметить, что при данном значении рН электролита арбутин ионизирован всего на 13 %, однако даже в этих условиях он обладает, хоть и незначительной, эффективной электрофоретической подвижностью.

Извлечение арбутина из сырья проводили в соответствии с методикой, приведенной в нормативной документации на анализируемое лекарственное растительное сырье. Для этого точную навеску (около 0,5 г) сырья помещали в коническую колбу вместимостью 100мл, заливали 50 мл воды и присоединяли к обратному холодильнику. Нагревание вели на плитке, поддерживая слабое кипение, в течение 30 минут. Горячее извлечение фильтровали в мерную колбу вместимостью 100 мл через бумажный фильтр диаметром 7 см. В колбу с сырьем повторно прибавляли 25 мл воды и кипятили в течение 20 минут. Повторное горячее извлечение фильтровали, объединяя извлечения. Остаток на фильтре промывали 20 мл горячей воды, также объединяя все извлечения. После охлаждения раствор доводили до метки водой и перемешивали. Далее 1 мл полученного раствора центрифугировали 5 мин при 8000 мин-1 и подвергали его анализу.

Результаты исследования и их обсуждение

На рисунках 2-4 представлены электрофореграммы раствора СО арбутина, а также извлечений брусники листьев и толокнянки листьев.

Рисунок 2. Электрофореграмма раствора СО арбутина

Рисунок 3. Электрофореграмма извлечения брусники листьев

Рисунок 4. Электрофореграмма извлечения толокнянки листьев

В результате в обоих видах сырья было установлено наличие арбутина. При этом коэффициент его разделения с сопутствующими компонентами пробы был достаточным для его количественного определения.

Следующим этапом исследований была валидационная оценка разработанной методики по показателям: линейность, прецизионность и правильность.

Линейность методики определялась по итогам анализа серии растворов СО арбутина различной концентрации (от 0,0051 до 0,0816 г/100мл). На рисунке 5 представлен градуировочный график зависимости площади пика арбутина от его концентрации в растворе. Полученная зависимость имеет линейный характер и описывается следующим уравнением: y=6,1873x-0,002. При этом коэффициент корреляции (r) был равен 0,999995, что позволяет использовать данное уравнение для количественного определения арбутина в указанном диапазоне концентраций.

Рисунок 5. Градуировочный график зависимости площади пика от концентрации арбутина в растворе

Для установления прецизионности (воспроизводимости) проводили 6 параллельных определений для каждого образца сырья. Расчет содержания (%) проводили по уравнению градуировочного графика арбутина, в пересчете на воздушно сухое сырье. Результаты оценки прецизионности методики количественного определения арбутина в брусники листьях и толокнянки листьях приведены в таблице 1-2.

Результаты оценки прецизионности методики количественного определения арбутина в брусники листьях

Источник

Количественное определение

I. Содержание арбутина в листьях толокнянки и брусники по ГФ ХI (вып. 2, ст. 26) определяют йодометрическим методом, основанным на окислении йодом гидрохинона, полученного после извлечения и гидролиза арбутина (схема 7).

Схема количественного определения арбутина в листьях толокнянки

(измельчение, просеивание, взятие навески)

Экстракция водой на кипящей водяной бане,

Добавление ацетата свинца

(кипятят 1,5 часа с обратным холодильником),

Добавление цинковой пыли для перевода

хинонов в гидрохиноны

Нейтрализация извлечения гидрокарбонатом натрия,

Йодометрическое титрование гидрохинона,

полученного после гидролиза арбутина

II. Салидрозид в экстракте из корневищ и корней родиолы розовой определяют спектрофотометрическим методом.

III. Колориметрический метод можно использовать с реактивом Фолина — Дениса*.

IV. Хромато-спектрофотометрический метод можно использовать для всех представителей этой группы.

*Примечание. Реактив Фолина-Дениса готовят следующим образом: смешивают 100 г вольфрамата натрия, 20 г фосфорно-молибденовой кислоты, 50 мл 85% фосфорной кислоты и 750 мл воды. Смесь кипятят 2 часа в колбе с обратным холодильником, после охлаждения доводят водой до 1000 мл.

Применение в медицине

 Листья и побеги толокнянки (5 см) и брусники (13 см) применяют в форме отваров при воспалительных заболеваниях мочевыводящих путей. Антисептическое действие обуславливается гидрохиноном, который образуется в организме при гидролизе арбутина и метиларбутина под действием ферментов и кислот. Раздражая почечный эпителий, арбутин оказывает также мочегонное действие.

 Фенологликозиды (салидрозид, розавин) родиолы розовой обладают стимулирующим, повышающим работоспособность, адаптогенным действием, жидкий экстракт родиолы розовой действует подобно препаратам женьшеня и элеутерококка.

 Флороглюциды папоротника мужского действуют как антигельминтные средства и применяются в виде густого экстракта.

 Салициловая кислота и ее производные известны как противовоспалительные, жаропонижающие и болеутоляющие средства.

Источник

Содержание арбутина в листьях брусники определяют методом

Капли датского короля

Капли датского короля.

Российская военная фармакопея, 1913 год.

Помада

Крем Помада.

Neu Arzneibuch, 1584 год.

ГФ11 ч.2 Листья брусники

Государственная Фармакопея СССР издание 11 часть 2 1990 год (ГФ 11 ч2) Стр. 278-279 Листья брусники.

Читайте также:  Какое алоэ используют для лечения

27. FOLIA VITIS-IDAEA
ЛИСТЬЯ БРУСНИКИ
FOLIA VACCINII VITIS-IDAEA
Собранные до начала цветения или после созревания плодов и высушенные листья многолетнего вечнозеленого дикорастущего кустарничка брусники обыкновенной — Vaccinium vitis-idaea L., сем. вересковых — Ericaceae.

Внешние признаки.
Цельное сырье. Листья короткпчерешковые, кожистые, эллиптические или обратнояйцевидные, на верхушке притупленные или слабовыемчатые с цельными или слегка зазубренными, завернутыми вниз краями, длиной 7— 30 мм, шириной 5—15 мм. Листья сверху темно-зеленые, снизу светло-зеленые с ясно заметными темно-коричневыми точками (железками). Запах отсутствует. Вкус горький, вяжущий.
Измельченное сырье. Кусочки листьев различной формы, проходящие сквозь сито с отверстиями диаметром 3 мм. Цвет от светло-зеленого до темно-зеленого. Запах отсутствует. Вкус горький, вяжущий.

Микроскопия.
При рассмотрении листа с поверхности видны слегка извилистые стенки клеток верхнего и нижнего эпидермиса. Устьица мелкие, окружены двумя околоустьичными клетками, расположенными параллельно устьичной щели (парацитный тип). На нижней стороне листа имеются железки. Они состоят из многоклеточной ножки, постепенно переходящей в овальную многоклеточную головку с коричневым содержимым. По жилкам встречаются редкие одноклеточные прямые или изогнутые волоски с толстыми стенками и гладкой или слабобородавчатой поверхностью. В мезофилле содержатся редкие одиночные призматические кристаллы оксалата кальция.

Качественные реакции.
Измельченные листья в количестве 0,5 г (см. раздел «Количественное определение») кипятят с 10 мл воды в течение 2—3 мин и фильтруют через бумажный фильтр.
К 1 мл фильтрата (в фарфоровой чашке) прибавляют 4 мл раствора аммиака и по каплям 1 мл 10 % раствора натрия фосфорно-молибденовокислого в хлористоводородной кислоте; появляется синее окрашивание (арбутин).
К 2—3 мл фильтрата (в фарфоровой чашке) прибавляют 2— 3 капли раствора железоаммониевых квасцов; появляется зеленовато-черное окрашивание (дубильные вещества).
Примечание. Приготовление 10% раствора натрия фосфорно-молибденовокислого: 10 г натрия фосфорно-молибденовокислого растворяют в 75,6 мл концентрированной хлористоводородной кислоты.

Числовые показатели.
Цельное сырье. Арбутина не менее 4,5 %; влажность не более 13 %; золы общей не более 7 %; золы, нерастворимой в 10 % растворе хлористоводородной кислоты, не более 0,5 %; листьев почерневших и побуревших с обеих сторон не более 7 %; измельченных частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 3 мм, не более 2 %; других частей растения не более 1 %; органической примеси не более 1 %; минеральной примеси не более 0,5 %.
Измельченное сырье. Арбутина не менее 4,5 %; влажность не более 13 %; золы общей не более 7 %; золы, нерастворимой в 10 % растворе хлористоводородной кислоты, не более 0,5 %; кусочков почерневших и побуревших листьев не более 7 %; частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 3 мм, не более 5 %; органической примеси не более 1 %; минеральной примеси не более 0,5 %.

Количественное определение см. статью «Folia Uvae Ursi».

Упаковка.
Цельное сырье упаковывают в мешки тканевые или льно-джуто-кенафные не более 25 кг нетто.
Измельченное сырье фасуют по 100 г в пакеты бумажные типа II с последующим вложением в пачки картонные 8-1-4.

Срок годности 3 года.
Мочегонное средство.

Источник

Контрактное производство

Косметических средств, БАД к пище, фасовка пищевой продукции.

  • Вы здесь:
  • Возможности
  • Качество
  • Методики и тесты
  • Метод определения количественного содержания арбутина

Метод определения количественного содержания арбутина

Рис. № 1. Структурная формула арбутина

Арбутины(арбутозиды или эриколины) —гликозидыфенольноготипа с составом C12H16O7* ½ H2O (бета-D-глюкопиранозоиды), входят в группу бета-арил-гликозидов (производныегидрохинонов).Масса молекулярная 272,25.

Иначе могут называться: вакцинин, арбутозид, глюкопиранозид, гидрохинон-β-D-.

Гликозиды – это вещества, которые, расщепляясь, образуют гидрохинон и глюкозу. Биологические активные добавки, отвары и настойки, имеющие в составе арбутин, применяют в качестве мочегонных и антисептических средств. В парфюмерно-косметической индустрии арбутин используется как средство для отбеливания кожи.

Природные источники и получение арбутина

Рис. № 2. Брусника – источник арбутина

Арбутин обнаружен в листьях таких растений как грушанка, брусника, толокнянка, шелковица, бадан. Также недавно выявлен и в листьях кавказской черники, которая используется как заменитель чая. Больше всего арбутина содержат молодые листья растений.

Чтобы получить арбутин, листья этих растений кипятят в воде, осаждают вещества дубильные из полученной смеси. После выпаривания выделяется арбутин в кристаллическом виде и производится его обработка углем активированным.

Физические и химические свойства

Арбутин является горьким веществом, легко растворимым в горячей воде. Он не осаждается под воздействием растворов металлических солей. t плавления арбутина равна 170 °C.

При кристаллизации арбутина образуются шелковистые, длинные иглы.

Читайте также:  Спиртовой лосьон для лица с соком алоэ в домашних

Если арбутин взаимодействует с хлоридом железа, происходит его окрашивание в голубой цвет. Под действием эмульсина или серной разведенной кислоты арбутин расщепляется с образованием сахара и гидрохинона C6H4(OH)2.

Применение в урологии

Арбутины представляют собой наиболее мощные природные антисептики. Под их воздействием становится значительно меньше возбудителей инфекций урологических. Их бактерицидные свойства выражаются по отношению к грамположительным кокковым бактериям и, что особенно важно, к бактериям грамотрицательным. Ведь чаще всего урологические заболевания вызываются именно грамотрицательной флорой, которая весьма устойчива к действию большей части применяемых уросептиков и антибиотиков. Несомненный плюс арбутина — его избирательность. Его антимикробные свойства проявляются только по отношению к патогенным, т.е. вызывающим болезнь, микроорганизмам, а бактерии, полезные организму, не претерпевают изменений, и микрофлора остается в норме.

Лечебное действие арбутина основано на бактерицидном и мочегонном свойствах гидрохинона, сформированного в организме в результате гидролиза арбутина. Препараты, в составе которых присутствует арбутин, широко применяются в медицине с целью излечить мочекаменную болезнь, простатит, пиелонефрит, цистит, гастрит с пониженной секрецией, понос, подагру, и др.

Применение в косметологии

В косметологии используют арбутин для того, чтобы осветлить кожу. Это происходит из-за его способности к блокированию тирозиназы, участвующей в синтезе меланина.

Бледную кожу уже давно не считают признаком аристократической благородной красоты, тем не менее, кремами, отбеливающими кожу, пользуется немало женщин.

Гидрохинон чистый, так популярный ранее в средствах для отбеливания, признали как токсичный и канцерогенный, из-за чего сейчас его запрещается использовать в странах ЕС согласно решению Директивы 76/768/ЕЭС*(1), принятой Европейским Советом Сообществ.

Арбутин — это альтернатива применения чистого гидрохинона в косметологии. Он показал себя довольно мощным средством отбеливания кожи. Арбутин способствует осветлению веснушек и темных пятен, вызванных незащищенным и длительным пребыванием на солнце, старением и дисбалансом гормональной сферы. Добывают его из растений, поэтому многие косметические компании, которые не хотят использовать агрессивные химикаты, отдают предпочтение именно арбутину, используя его в качестве активного ингредиента в отбеливающих средствах.

Метод определения содержания арбутина

Компанией «КоролёвФарм» содержание арбутина в растительном сырье проверяется при входном контроле квалифицированными сотрудниками участка физико-химических испытаний, входящего в состав аналитической лаборатории.

Аналитическую пробу сырья измельчаем, помещаем в колбу на 100 мл, прибавляем 50 мл воды и нагреваем на плитке. Поддерживаем 30 мин слабое кипение. Горячее содержимое фильтруем в колбу мерную на 100 мл через фильтр бумажный. При этом избегаем попадания на фильтр частиц сырья. Повторно прибавляем в колбу с сырьем 25 мл воды и кипятим 20 мин. Горячее содержимое с сырьем переносим на тот же фильтр, остаток сырья на фильтре промываем 5-7 раз водой. К пробе прибавляем 3 мл раствора уксуснокислого свинца, перемешиваем и после охлаждения доводим водой объем фильтрата до метки. Помещаем колбу в кипящую баню водяную и выдерживаем до коагуляции осадка. Жидкость полностью отфильтровываем в колбу через фильтр, прикрываем воронку стеклом часовым. К фильтрату прибавляем 1 мл Н2SO4, колбу взвешиваем, присоединяем к холодильнику обратному и греем 2 часа на плитке. Поддерживаем равномерное слабое кипение.

Рис. № 3. Синее окрашивание титруемого раствора

Охлаждаем содержимое колбы, доводим водой до массы первоначальной, и раствор полностью отфильтровываем в колбу сухую через фильтр. Прибавляем к фильтрату 0,1 г пыли цинковой и встряхиваем в течение 4 мин. Нейтрализуем жидкость по бумаге лакмусовой натрием двууглекислым (около 1 – 1,5 г), прибавляем еще 2 г натрия двууглекислого и по мере его растворения фильтруем в колбу сухую через фильтр.

Переносим 50 мл пробы фильтрата в колбу на 500 мл, прибавляем 200 мл воды и, встряхивая, титруем немедленно из полумикро- или микробюретки йодовым раствором (0,1 моль/л) до образования синей окраски (рис. № 3). В качестве индикатора используем крахмал.

Содержание арбутина, пересчитанного на абсолютно сухое сырье, в % (А) вычисляем по формуле:

0,0136 – количество арбутина, которое соответствует 1 мл йода, (г);

V – объем йода, потраченного на титрование (мл);

м – масса сырья (г);

W – массовая потеря после высушивания сырья (%).

Специалисты технологического отдела компании «КоролёвФарм» для всех видов сырья, которое используется на производстве, создают спецификации. В них указывается, по каким показателям должен производиться входной контроль, нормативные значения, а также методы испытаний. Если по результатам проведенных испытаний содержание арбутина в сырье соответствует нормам по спецификации, сырье допускается до дальнейшей стадии контроля.

Источник